Obiektem badań był Sarcodon imbricatus gatunek grzyba (gromada Basidiomycota) rosnącego w lasach świerkowych, podlegający ścisłej ochronie w Polsce. Z warstwy hymenialnej wyprowadzono kultury in vitro. Dokonano analizy DNA otrzymanego mycelium metodą PCR-RFLP. W ramach optymalizacji warunków prowadzenia kultur przetestowano różne źródła węgla i azotu w podłożu, temperaturę inkubacji oraz optymalną wyjściową wartość pH podłoża. Największe przyrosty biomasy uzyskano na podłożu wg Lubińskiego o zoptymalizowanym składzie: fruktoza (50g/l), hydrolizat kazeiny (10g/l). Optymalną temperaturę inkubacji określono na 20°C, a optymalna wyjściowa wartość pH podłoża została ustalona na równą 6,0. Druga część pracy obejmowała analizę chemiczną (kwasy tłuszczowe, sterole, aminokwasy, związki indolowe, kwasy fenolowe, polisacharydy, składniki mineralne). Do rozdziału i/lub oczyszczania związków zastosowano metody chromatograficzne Do oznaczeń ilościowych wykorzystano metodę HPLC. Identyfikację związków przeprowadzono w oparciu o metody spektralne (1H NMR, EI-MS). W ramach przeprowadzonych badań chemicznych oznaczono: zawartość 8 kwasów tłuszczowych w owocnikach - nasyconych w tym 3 kwasy nienasycone – oleinowy, linolowy i α-linolenowy oraz 11 kwasów tłuszczowych w mycelium z kultur in vitro (w tym 8 nienasyconych m.in. α-linolenowy), ergosterol, zarówno w owocnikach, jak i kulturach in vitro, ; związek ten oznaczono ilościowo, wyizolowano i zidentyfikowano, potwierdzono tożsamość nadtlenku ergosterolu w owocnikach, zawartość aminokwasów proteinogennych (egzo- i endogennych), w owocnikach oznaczono ilościowo 14 aminokwasów proteinogennych (w tym 8 egzogennych dla człowieka), w mycelium z kultur in vitro – 7 związków (w tym 4 aminokwasów egzogennych) zarówno w owocnikach jak i w mycelium - pochodne indolu - tryptofan, tryptaminę, serotoninę i śladowe ilości melatoniny w owocnikach oraz tryptofan, tryptaminę, serotoninę w mycelium z kultur in vitro, związki te zidentyfikowano metodami spektralnymi, zarówno w owocnikach jak i mycelium oznaczono 3 kwasy fenolowe (p-hydroksybenzoesowy, protokatechowy i syryngowy), których tożsamość potwierdzono metodami spektralnymi, wyizolowano 3 frakcje polisacharydowe FOI, FOII, FOIII, z owocników i 2 z mycelium FKI i FKII, analiza jakościowa polisacharydów wyizolowanych frakcji wykazała, że składają się one z galaktozy i fukozy (FOI, FKI) oraz glukozy i fukozy (FOII, FKII), frakcja FOIII z owocników to glukan, oznaczono procentową całkowitą zawartość cukrów, kwasów uronowych oraz masy cząsteczkowe w wyizolowanych frakcjach, oznaczono skład jakościowy i ilościowy składników mineralnyh w materiale in vivo i in vitr. Dokonano oceny aktywności biologicznej (przeciwbakteryjnej w stosunku do szczepów bakteryjnych G(+) i G(-), przeciwwirusowej ; w stosunku do wirusa HPV-1 oraz cytotoksycznej w stosunku do linii komórek nowotworowych – zwierzęcych - melanoma B16, sarcoma XC i ludzkiej raka sutka w testach in vitro wybranych frakcj polisacharydowych otrzymanych z owocników i z mycelium z kultur in vitro. Frakcje wyizolowane zarówno z owocników, jak i z kultur in vitro wykazały słabą aktywność przeciwbakteryjną, zdolność hamowania replikacji wirusa HPV-1 oraz aktywność cytotoksyczną w stosunku do wymienionych linii nowotworowych.
Mar 16, 2023
Nov 21, 2012
29
0
http://dl.cm-uj.krakow.pl:8080/publication/810
Edition name | Date |
---|---|
ZB-113478 | Mar 16, 2023 |
Sułkowska-Ziaja, Katarzyna
Kubica, Paweł
Klimek-Szczykutowicz, Marta Karolina
Szopa, Agnieszka
Szopa, Agnieszka
Grabowska, Karolina
Wyszkowska-Kolatko, Magdalena