Search for: [Abstract = "U chorych na przewlekłą białaczkę szpikową \- CML \(Chronic Myeloid Leukemia\) występuje charakterystyczna anomalia chromosomowa w komórkach macierzystych układu hematopoetycznego\: tzw. chromosom Philadelphia \(Ph\). Powstaje on w wyniku wzajemnej translokacji pomiędzy długimi ramionami chromosomu 9 oraz 22. Molekularnym odpowiednikiem chromosomu Ph jest gen fuzyjny BCR\-ABL. Jego podwyższona ekspresja prowadzi do niekontrolowanej proliferacji komórek hematopoetycznych oraz zahamowania procesu apoptozy i różnicowania. Obecność chromosomu Ph można stwierdzić kilkoma metodami m.in. cytogenetyka klasyczna, FISH \(Fluorescence In situ Hybridization\) oraz RT\-PCR \(Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction\). Jedną z technik biologii molekularnej wykorzystywanych w diagnostyce CML jest również metoda RQ\-PCR \(Real\-time Quantitative PCR \- polimerazowa reakcja łańcuchowa w czasie rzeczywistym\). Pozwala ona niezwykle precyzyjnie określić poziom ekspresji genu, a ze względu na zastosowanie sondy molekularnej, metodę tę cechuje bardzo wysoka specyficzność i czułość. Pozwala ona na sprawne monitorowanie postępów leczenia i choroby resztkowej m.in. w grupie chorych cierpiących na przewlekłą białaczkę szpikową. Wzrost ekspresji genu BCR\-ABL stwierdzony tą techniką, pozwala na wykrycie nawrotu choroby na wiele miesięcy przed pełnoobjawową wznową białaczki i modyfikację leczenia. Możliwość śledzenia zmian ilości transkryptu na poziomie genomu w trakcie leczenia CML, ma więc ogromne znaczenie prognostyczne. Do grupy badanej zakwalifikowano 60 pacjentów Kliniki Hematologii CMUJ w Krakowie chorych na CML. Ekspresję genu BCR\-ABL mierzono średnio co trzy miesiące. W wyniku analiz przeprowadzonych testem RQ\-PCR u większości pacjentów zaobserwowano stopniowy wyraźny spadek poziomu transkryptu BCR\-ABL w trakcie terapii Imatinibem. U części chorych spośród badanej grupy poziom transkryptu utrzymywał się na stałym poziomie, natomiast u niektórych pacjentów mimo podawania leku, poziom badanego genu wzrastał. Czułość testów RQ\-PCR wynosiła 10\-4 – 10\-5. Analizę RQ\-PCR przeprowadzano na aparacie ABIPRISM 7700 przy użyciu technologii TaqMan. Jako kontrolę pozytywną zastosowano rozcieńczenia plazmidu. Wahania krzywych obrazujących przebieg transkryptu w czasie leczenia, wyrażony stosunkiem liczby kopii transkryptu BCR\-ABL do liczby kopii genu ABL, w sposób istotny korelowały z obrazem klinicznym u badanych chorych. U pacjentów, u których zaobserwowano stopniowy spadek transkryptu w teście RQ\-PCR wystąpiła całkowita remisja hematologiczna oraz remisja cytogenetyczna. U pacjentów, u których nie zaobserwowano spadku transkryptu lecz jego stałe utrzymywanie się na podobnym wysokim poziomie doszło do progresji choroby do kryzy blastycznej. Technika RQ\-PCR jest bardzo dobrą metodą służącą monitorowaniu poziomu transkryptu BCR\-ABL. Jest ona także czułą i niezawodną metodą odpowiednią do monitorowania choroby resztkowej u pacjentów chorych na CML leczonych Imatinibem i innymi inhibitorami kinaz tyrozynowych."]